2014檢驗技師檢驗基礎講解：抗核抗體檢測方法

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　　ANA的檢測方法

　　由于ANA的復雜性及多樣性，故測定方法繁多。目前ANA常用的方法有免疫熒光法、放射免疫法、ELISA、免疫雙擴散、對流免疫電泳及免疫印跡技術等。

　　1.免疫熒光法檢測血清總ANA最常用的方法是熒光免疫組化法。多用小鼠肝切片或印片作為細胞核基質，結果比較穩(wěn)定可靠，在熒光顯微鏡下見到的細胞核有熒光著色為陽性反應。如將患者血清先進行不同比例的稀釋，可以做大致的定量試驗，在1：80稀釋仍然雖陽性時，對SLE的診斷有較大的參考價值。在油鏡下觀察結果，可以將ANA陽性的熒光現(xiàn)象分成4種主要的熒光核型，核型的確定對臨床診斷有進一步的參考價值。①周邊型表示抗DNA抗體存在;②均質型表示有抗DNP抗體;③斑點(顆粒)型多為抗ENA抗體;④核仁型多為抗核小體抗體。SLE患者常出現(xiàn)周邊型、勻質型或混合型，斑點型多見于混合結締組織病，而硬皮病多為核仁型;周邊型對SLE有較高的特異性。

　　近年有人用錐蟲或血鞭毛蟲(例如綠蠅短膜蟲試驗)作基質測定抗dsDNA抗體，因為這些血寄生蟲的動基體內含大量的純dsNDA，無其他抗原干擾;在陽性結果時，可見鞭毛一端的動基體顯示清晰的熒光。因此該試驗用于測定抗dsDNA抗體具有特異性強和敏感性高的優(yōu)點。另外，短膜蟲對人畜無害，可以人工養(yǎng)殖，來源方便，值得推廣。

　　2.放射免疫法常用檢測抗DNA抗體，有Farr法及過濾法。①Farr法的原理為用同位素標記DNA，被標記的DNA和被檢血清的抗DNA抗體結合，經50%硫酸銨飽和液沉淀，然后比較沉淀物和上清液中的放射活性，從而得出DNA結合活性，一般結合率大于20%為陽性。②過濾法是在分離結合物時用纖維素酯薄膜濾器(孔徑為0.45μm)進行過濾，游離的DNA被濾去而與抗體結合的復合物被阻留在濾膜上。

　　3.ELISA臨床上主要是應用間接ELISA檢測抗dsDNA抗體，其重復性及敏感性均較對流免疫電泳及雙擴散為高。目前已有試劑盒供應。

　　4.免疫印跡(immunoblotting)先將混合抗原作凝膠電泳，分離開不同的區(qū)帶，然后將這些帶轉印到硝酸纖維素膜上，最后用酸標抗體或放射性同位素標記抗體進行檢測和分析(方法見第十五章)。由于該試驗不需純化的單個抗原，可在同一固相上作多項分析檢測，靈敏度高，特異性強。故目前已廣泛用于自身免疫病患者血清中多種自身抗體的檢測，如檢測抗Sm抗體、抗RNP抗體、抗SS-A抗體及SS-B抗體等。

　　另外，還可用傳統(tǒng)的瓊脂雙向擴散法、對流免疫電泳法、間接血凝法和補體結合試驗等。這些試驗要求的實驗條件比較低，但敏感性也比較低。

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