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丙型肝炎病毒的微生物學診斷

　　一、放射免疫診斷(RIA)或酶聯(lián)免疫試驗(ELISA)檢測血清中抗HCV

　　1989年，Kuo等建立了抗-C-100放射免疫試驗方法(RIA)，隨后Ortho公司又研制成功酶聯(lián)免疫試驗方法(ELISA)檢測抗-C-100.這兩種方法均用重組酵母表達的病毒抗原(C-100-3，為NS4編碼的蛋白，含363個氨基酸)，經(jīng)純化后包被微量塑料板孔，然后加被檢血清，該病毒抗原即與被檢血清中抗-C-100結(jié)合，最后加同位素或酶標記的鼠抗人lgG單克隆抗體，加底物顯色判斷結(jié)果。

　　用上述酶聯(lián)免疫試驗法(ELISA)檢測抗-C-100有如下缺點：

　　1. 抗-C-100出現(xiàn)較晚，約半數(shù)輸血后丙型肝炎病人于輸血后4～6個月抗—C-100首次陽轉(zhuǎn)，因此，不宜作為急性丙型肝炎的常規(guī)實驗室診斷;

　　2.抗-C-100不是中和抗體，也不是lgM抗體，而是lgG抗體;

　　3.本法不夠靈敏，少數(shù)丙型肝炎病人檢測不到抗-C-100;

　　4.有非特異性，一些自家免疫性慢性肝病患者可出現(xiàn)假陽性，因此，抗HCV陽性需作重組免疫印跡試驗(Recombinant Immune BlotAssay，RIBA，或稱 Western Blot)證實。

　　由于HCV核心抗體出現(xiàn)較早，因此，最近美國第二代酶聯(lián)免疫試驗法(ELISA)檢測抗HCV.該試劑盒采用HCVC區(qū)編碼蛋白C-22-3和非結(jié)構(gòu)區(qū)NS3編碼蛋白C-33-3和C-100-3包被載體。用本法檢測抗HCV，其檢出率可提高25～30%，且檢出抗HDV的時間也可提早16～42天。

　　二、HDV cDNA/聚合酶鏈反應(yīng)(HCV cDNA/Polymerase Chain Reaction，RTPCR)測定肝和血清中HCV RNA.

　　本法是將HDV RNA逆轉(zhuǎn)錄為HCV DNA，選用高度保守的5′非編碼區(qū)引物擴增放大后作電泳觀察結(jié)果。本法較靈敏。由于肝和血清中HCv RNA出現(xiàn)較抗-HCV為早，一些HCV感染者抗HCV尚未陽轉(zhuǎn)時，其肝和血清中已可測到HDv RNA.HCV RNA陽性，說明病毒在體內(nèi)復制;HCV RNA陰轉(zhuǎn)，說明病毒被清除。因此，RT-PCR可作為丙型肝炎的早期診斷和獻血員篩查的出現(xiàn)指標，也可作為丙型肝炎預(yù)后的一個指標。

　　三、免疫組化法檢測肝組織中HCV抗原

　　感染HCV的黑猩猩或病人血清中提取lgG，用間接免疫熒光或間接免疫酶組化法檢測肝內(nèi)HCV抗原。

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